定量色譜方法之外標法和內標法

一、外標法
   當參考標準品與樣品在不同的色譜圖上進行分析時，用外標法。定量基于樣品的峰面積/高（HPLC或GC）或強度（TLC）與分析對象、參考標準品的比值。
更適合用外標法的樣品如下：
1.樣品具有單一的目標濃度和狹窄的濃度范圍 ，例如驗收和出廠檢驗。
2.簡便的樣品制備操作。
3. 增加走基線的時間，為檢測可能的額外峰，如雜質試驗。

二、內標法
    加入一種已知純度并且在分析中不產(chǎn)生干擾的化合物至樣品混合液中，定量基于被分析的化合物與內標的響應比值與參考標準品得到的比值進行比較。這一方法很少用于TLC。
更適合用內標法的樣品如下：
1.復雜的樣品制備過程，如多次提取。
2.低濃度的樣品（靈敏度是確定的），如藥代動力學的研究。
3.在樣品分析中預計是很寬的濃度范圍，如藥物動力學研究。
  雖然CDER不規(guī)定方法應該用內標或外標法用于定量，但一般的看法是用于驗收、穩(wěn)定性和TLC用外標法，對生物體液和GC用內標法。工作濃度為方法中規(guī)定的被分析對象的目標濃度。保持樣品濃度與標準的濃度相近可以改善方法的準確性。

三、建議
1.如果參考標準品的純度校正因子已知，那么在計算中應該包括。
2.在方法中要規(guī)定標準品和樣品的工作濃度。


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